輸入業者のチェックに合格する、インドネシア産スナッパーのCOI DNAバーコーディング向け実務的輸出対応SOP。サンプリング計画、エタノール保存、チェーン・オブ・カストディ、汚染管理、文書化、BOLDの曖昧な結果の扱い方を含む。
もしスナッパーを出荷しているなら、なぜDNAバーコーディングが重要かは既にご存知でしょう。フィレにすると視覚的な識別手がかりが失われます。輸入業者はかつてないほど厳格になっており、単一の不一致がコンテナの遅延を招くことがあります。本書は、翌日から使える実務的なSOPとして作成しました。これは、2025年に米国SIMPおよびEUのトレーサビリティチェックに合格するために、当社がスナッパーのロットを準備する際に実際に行っている手順そのものです。
合格準備が整ったDNAバーコーディングプログラムの3本柱
- 弁護可能なサンプリング計画。マージンを損なわずにロットあたり十分なユニット数を選定すること。
- 清潔で一貫した組織取り扱い。クロスコンタミネーションなし。バイアルの漏れなし。ラベル欠損なし。
- 完全なチェーン・オブ・カストディ記録。記録に残っていないことは起こらなかったと見なされます。
当社の経験では、輸出者が失敗する場合、その原因はめったに遺伝子そのものではなく、それを取り巻くプロセスです。
1–2週目：サンプリング体制とツールの整備
最初にSKUとリスクをマッピングしてください。皮なしフィレや混合種の購買は、WGGS（Whole Gilled & Gutted）よりもリスクが高くなります。例えば、Snapper Fillet (Red Snapper) のようなフィレや Red Snapper Portion (WGGS / Fillet) のようなポーションは、Snapper WGGS (Red Snapper - Whole Gilled & Gutted) のような頭付きWGGSよりも厳格な管理が必要です。それがサンプリング強度を決定します。
キットを揃えます。推奨品目は以下の通りです：
- Oリング付きねじ式チューブ（2 mlまたは5 ml）。95～100パーセントの変性されていないエタノールを充填。組織体積の10倍のエタノール比率を目安に。
- 滅菌ディスポーザブルのメス刃。サンプルごとに刃を交換するか、火炎滅菌。次亜塩素酸ナトリウム10％浴で処理し、蒸留水で洗い、70％エタノールで仕上げる。
- パウダーフリー手袋。ユニットごとに手袋を交換。
- 防水かつエタノール耐性のラベルと、細字のエタノール耐性ペン。
- サブサンプルセットごとのジップバッグと改ざん防止シール。
- 簡易写真キット。清潔なまな板、秤、日付カード、およびロットIDカード。
失敗しないラベル形式：Country-Plant-LotID-UnitNumber-YYMMDD-Sample#。例：IDN-FOODHUB-GBSN240315-042-01。可能であれば事前印字してください。先にラベルを貼り、その後切断すること。順序を逆にしてはいけません。
3–6週目：生産工程でのサンプリング、保存、記録
輸出ロットあたり、スナッパーのサンプルはいくつ必要ですか？
弁護可能な初期値として n = √N を使用してください。ここで N は販売単位またはカートン数です。最低5サンプル、最大30サンプル（大ロットの上限）。ハイリスク品目や初回サプライヤーの場合、最初の2出荷は倍増してください。例：400カートンのロットでは √400 = 20 ユニットを抽出します。
各サンプリングされたユニット内での取り扱い：
- フィレパック：ランダムに1枚のフィレを選び、内側の背側白色筋肉からエンドウ豆大の一片を採取。皮、血線、腹フラップは避けること。
- WGGS：胸びれの後ろの白色筋肉を採取。皮や鱗は避ける。
- ポーション：フィレと同様のアプローチ。露出面ではなく内部から採取すること。
各ユニットごとにバイアルを2本採取してください。一本は検査ラボへ、もう一本は輸入検証用のバックアップとして凍結保管するか、エタノール中で室温保管します。
DNA検査において、95％エタノールと冷凍のどちらが良いですか？
現場収集ではエタノールが優れます。常温でDNAを保存でき、適切な申告のもとで輸送が容易です。−20～−80℃での冷凍はDNAを非常に良好に保ちますが、ドライアイスの手配が時間とコストを追加します。エタノールが制限される場合、高品質のシリカゲル乾燥材が実用的な代替になります。組織への浸透は遅いので、約3×3×3 mm程度の小片にしてください。
人をつまずかせる主要ポイント：
- チューブは少なくとも70％をエタノールで満たし、組織が完全に浸るようにする。吸収した場合は24時間後に追加入れする。
- 組織を詰め込みすぎないこと。チューブには小さなキューブを1つだけ入れる。
- Oリング付きのねじキャップを使用すること。抵抗を感じるまでしっかり締める。
フィレ化したスナッパーの採取でクロスコンタミネーションを避けるには？
チームが速く動きすぎると汚染が発生するのをよく見ます。スピードを落とし、サンプルは一度に一つずつ扱ってください。以下を必ず実行してください：
- 各ユニットごとに新しい手袋と新しいまたは滅菌済みの刃を使用。
- ユニット間でまな板を清掃。次亜塩素酸ナトリウム10％で拭き、蒸留水で流し、70％エタノールで仕上げ、乾燥させる。
- 内部の筋肉から採取。ほかの魚に触れた面は避ける。
- 組織が準備できるまでチューブは閉じたままにする。採取後は直ちに蓋を閉める。
- 10サンプルごとにブランクコントロールを含める。滅菌刃をエタノールのみに触れさせ、それをラベル付きチューブに入れる。DNAが検出されてはならない。
2025年に輸入業者が期待するチェーン・オブ・カストディの詳細は？
良好なチェーン・オブ・カストディは、現場にあなたがいなくても物語を語ります。フォームには次を記録してください：
- ロットID、SKU、申告された種名。学名およびFAO/ASFISの3文字コード。
- 漁獲海域と漁具の種類。FAO主要海域、可能であればサブエリア、およびインドネシアでの手釣りや延縄などの情報。
- 船名またはサプライヤーバッチ、上陸日、製造日。
- ロット内の販売単位数と選定方法。例えば積み上げ位置全体での体系的無作為抽出など。
- サンプラー氏名と署名、サンプルごとの日時、チューブIDとユニットIDの照合。
- サンプルバッグおよび保管ボックスの保管条件と封印番号。
- ラボ送付時の宅配業者と追跡番号。
- 写真バウチャー。ユニットラベルの写真、フィレまたは魚の全体像、ラベル付きチューブと切断箇所のクローズアップ。
当社はロットごとにすべてのページを含むPDFを1つ保持し、チューブIDとユニット番号を対応付けたCSVも添付します。監査人が要求した場合、数分以内にファイルを送信できるようにしています。
7–12週目：ラボ調整、報告、拡張
スナッパー種の確認に受け入れられる遺伝子領域はどれか？
輸入業者のチェックでは、魚類の全球的なバーコーディング標準であるCOI-5Pが一般的に受け入れられています。米国SIMPの種確認でも広く認められており、ラボワークが簡便なのが利点です。COIが劣化または不明瞭な場合は16Sが補助的に有効です。Lutjanus属やPristipomoides属の一部種では、COIで1％以内の近接差異となることがあるため、その場合はcytbのような二次マーカーが有用です。開始前にラボとエスカレーションルールを合意してください。
インドネシアにおけるDNAバーコーディングの所要時間と費用
一般的なインドネシアのラボは、受領からCOIバーコードの返却まで3～7営業日が標準です。ラッシュサービスは限られたサンプルで48時間が一般的です。ジャワの工場から結果までのエンドツーエンドは、国内宅配で通常5～10日です。海外でのシーケンスは輸送時間が追加されます。
コストはボリュームによりますが、標準的なCOIでサンプルあたり20～60 USDを見ています。ボリュームバンドルで単価は下がります。ユニットあたりバイアル2本と、ロットごとに1～2回の再検査を想定して予算化してください。
BOLDやGenBankで複数の近接一致が返った場合はどうするか？
慌てないでチェックリストに従って対応してください。
- 一致率（percent identity）と最短近傍距離を確認。上位ヒットが98％以上で、次点がそれより数十分の1低ければ、正しい判定の可能性が高い。
- 地理的妥当性を検討する。インドネシアに生息しない種への上位ヒットは警戒すべき。
- BOLDの系統樹と標本情報を精査する。よく管理された記録は一般的なエントリに優先される。
- COIが依然曖昧なら二次マーカーにエスカレーションする。多くのラボは同一DNA抽出液でcytbを実行できる。
- ラベルを調整する。もし二種がCOIで区別不能で、かつ法的に同一の市場名を共有するなら、輸入業者と受け入れ可能な申告名を合わせる。
判断は記録化すること。輸入業者は曖昧さを透明に扱った証拠を重視します。
バーコーディングプログラムを破綻させる5つの誤り
- サンプル数が少なすぎる。n = √N、最低5は床（floor）であり上限ではない。
- ラベル不良。エタノールでインクが落ちる。エタノール耐性ラベルを使用し、可能なら事前印字する。
- 複合サンプル（コンポジット）。複数ユニットの組織を一つのチューブに混合してはならない。トレーサビリティを失う。
- 保持サンプルがない。輸入業者から再試験を求められた際に、完成品を開封したくない状況を避けるために保管セットを残す。
- 写真バウチャーを省略する。フィレ、ユニットラベル、チューブの鮮明な写真は問題解決の命綱となる。
2025年のEUシーフード・トレーサビリティと米国SIMPの整合性
ここ6か月で変わったのは、遺伝子そのものよりもデータの期待値です。EUの買い手はエンドツーエンドのデジタルトレーサビリティにより速く移行しており、テスト、FAO海域、船舶データが商業インボイスや漁獲証明書に明確に結び付くロットを好みます。米国SIMPは依然として種の検証とリスクの高い種の漁獲詳細に焦点を当てています。スナッパーは種群が複雑なためしばしば精査されます。COI検査、チェーン・オブ・カストディ、ラベルがインボイスおよびカートンと整合していれば、ロットは通過します。
複数のスナッパー種を複数フォーマットで取り扱う場合、SKUを明確にしておいてください。例えば、Goldband Snapper WGGS と Goldband Snapper Fillet を同一ロットで混合してはいけません。Goldband Snapper Portion のようなポーションSKUは独立したロットとして分離し、個別にサンプリングしてください。自明のように思えますが、混合ロットの問題は依然として頻繁に見られます。
今日から使えるクイックリファレンス
冷凍フィレのDNAバーコーディング用バイアルのラベリング方法
事前印字されたエタノール耐性ラベルを使用し、切断前にチューブIDを貼付。ロットID、SKU、ユニット番号、日付、サンプラーを記録する。ラベル付きチューブと印刷したIDカードを写真フレーム内に配置してバウチャー撮影する。
DNAバーコーディングのためにいくつのフィレをサンプリングするか
n = √N（販売単位）、最低5、ロットあたり上限30。初回出荷または類似種リスクが高い場合は倍増。
保存方法：シリカゲル対エタノール
エタノールはより迅速で扱いやすい。エタノールが制限される場合はシリカゲルが有効。組織は小さくし、過剰な乾燥材を使用し、出荷前に少なくとも24時間密封しておく。
スナッパーに対して米国SIMPで受け入れられるCOIバーコード
はい。COI-5PはSIMPの種確認において米国の輸入業者に広く受け入れられています。COIが不確定な場合は二次マーカーを追加してください。
輸入業者が期待するチェーン・オブ・カストディの詳細
ロットとユニットのマッピング、サンプラー署名、写真バウチャー、保管条件、封印番号、宅配追跡、そしてチューブIDに遡れるラボ報告ID。フィレを1ステップでチューブに追跡できれば合格です。
リソースと次のステップ
小さく始めてください。最も流通量の多いスナッパーSKUを選び、次のロットでこのSOPを実行してください。チームが清潔なラベル、完全なチェーン・オブ・カストディPDF、インボイスと一致するバーコードを作成できるようになったら、Goldband Snapper Bites のような関連SKUに展開するか、非スナッパーの白身魚ラインをクロスチェックしてシステムを検証してください。
SKUと市場に合わせたサンプリング計画のカスタマイズや48時間ターンアラウンド可能な現地ラボの選定支援が必要ですか？こちらからお問い合わせください： Contact us on whatsapp。輸出準備済みでSIMPおよびEUトレーサビリティのワークフローに適合する製品を確認中であれば、View our products をご参照ください。
良質なDNA作業は基本にかかっています。厳密なサンプリング、清潔な技術、堅固な書類管理。この三つを徹底すれば、スナッパーの出荷は問題なく通ります。